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免疫细胞的检测

2. 免疫细胞的分离与功能检测

2.1 免疫细胞的分离

2.1.1 密度梯度离心法

• 密度梯度离心法是分离外周血单个核细胞（PBMC）的常用方法。
• 利用聚蔗糖（ficoll）和泛影葡胺（hypaque）配成的淋巴细胞分离液进行离心，将不同密度的血细胞分层。
• PBMC由于密度稍低于分离液，位于分离液的界面与血浆层之间，通过吸出这一层的细胞即可获得PBMC。

2.1.2 磁激活细胞分选法(MACS)

• 利用磁性微珠的吸附作用，包被上针对某种细胞表面抗原的特异性抗体制成免疫磁性微珠。
• 阳性分离法通过免疫磁珠收集与磁珠结合的细胞，而阴性分离法通过免疫磁珠去除不需要的细胞。

2.1.3 流式分选法（FCM）

• 流式细胞术是采用荧光激活细胞分选仪（FACS）对细胞进行快速鉴定和分类的技术。
• 使液体流束形成含有细胞的带电液滴，通过恒定的电场实现对细胞的分选。
• 流式细胞术分离细胞准确快速，分选纯度高，不损伤细胞活性，并可直接统计出各类细胞的相对含量。

2.1.4 抗原肽-MHC分子四聚体技术

• 抗原肽-MHC分子四聚体技术是定量检测抗原特异性细胞的有效方法。
• 通过体外制备 MHC-抗原肽复合物，与T细胞的TCR特异性结合直接检测抗原特异性T细胞。

2.2 免疫细胞的功能检测

2.2.1 T细胞功能检测

• 增殖试验是通过体外引起T细胞活化，活化后的T细胞发生增殖，转化为淋巴母细胞。
• 3H-胸腺嘧啶掺入法通过检测掺入细胞内的3H-胸腺嘧啶的放射性强度反映T细胞的增殖情况。
• MTT法通过检测细胞培养物OD值反映细胞增殖水平。
• 混合淋巴细胞反应常用于器官移植前的组织配型，以测定受者和供者主要组织相容性抗原的相容程度。

2.2.2 B细胞功能检测

• 溶血空斑试验（hemolytic plaque assay）是体外检测B细胞抗体生成能力和计数抗体生成细胞的方法。

2.2.3 细胞毒实验

• 51Cr释放法是体外检测细胞毒活性的“金标准”，通过检测培养上清液中放射性同位素51Cr的量反映效应细胞对靶细胞的杀伤活性。
• 乳酸脱氢酶（LDH）释放法通过检测培养上清中的LDH的活性反映效应细胞的杀伤活性。

2.2.4 细胞凋亡检测

• 琼脂糖电泳法通过检测DNA断裂产生的寡核苷酸片段反映细胞凋亡情况。
• TUNEL检测法通过染色体DNA双链断裂产生的黏性3'-0H末端指示凋亡细胞。
• 流式细胞术通过检测磷脂酰丝氨酸（PS）和细胞核染料来反映细胞凋亡情况。

2.2.5 细胞因子检测

• 生物活性检测法根据细胞因子所具有的生物学活性反映其活性和功能。
• 细胞增殖或增殖抑制法通过检测细胞增殖水平和存活状态确定细胞因子的含量和活性。
• 免疫学检测法通过抗原抗体反应的特异性检测细胞因子。
• 分子生物学检测法通过核酸杂交技术检测细胞因子的mRNA存在和表达。
• 流式细胞术检测法通过检测分说细胞因子的细胞了解产生细胞因子的细胞类型及其数量和功能。 """